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丙二酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA试剂盒

更新时间:2023-05-31

简要描述:

丙二酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA试剂盒用于测定样本丙二酰辅酶A(malonyl CoA)含量。

型号:96T/48T点击量:354
品牌研尊生物供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合

丙二酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA试剂盒使用说明书:

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:

96T。

1ng/L-50ng/L。

使用目的:本试剂盒用于测定样本丙二酰辅酶A(malonyl CoA)含量。

实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中丙二酰辅酶A(malonyl CoA)水平。用纯化的丙二酰辅酶A(malonyl CoA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入丙二酰辅酶A(malonyl CoA),再与HRP标记的丙二酰辅酶A(malonyl CoA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的丙二酰辅酶A(malonyl CoA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中丙二酰辅酶A(malonyl CoA)浓度。

丙二酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA试剂盒组成:

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(80ng/L)

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本要求:

1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40ng/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

20ng/L

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

10ng/L

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

5ng/L

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

2.5ng/L

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

1.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

4.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

5.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

6.温育:操作同3。

7.洗涤:操作同5。

8.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

9.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

10.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结:

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项:

1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4、请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6、底物请避光保存。

7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9、本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期:

1、试剂盒保存:2-8℃。

2、有效期:6个月。




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